定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技術(shù)有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術(shù)是指以外參或內(nèi)參為標(biāo)準(zhǔn)，通過對(duì)PCR終產(chǎn)物的分析或PCR過程的監(jiān)測(cè)，進(jìn)行PCR起始模板量的定量。狹義概念的定量PCR技術(shù)（嚴(yán)格意義的定量PCR技術(shù)）是指用外標(biāo)法（熒光雜交探針保證特異性）通過監(jiān)測(cè)PCR過程（監(jiān)測(cè)擴(kuò)增效率）達(dá)到定量起始模板數(shù)的目的，同時(shí)以內(nèi)對(duì)照有效排除假陰性結(jié)果（擴(kuò)增效率為零）。
PCR過程的監(jiān)測(cè)有多種檢測(cè)模式。zui常用的有三種檢測(cè)模式：
⑴SYBR Green I 檢測(cè)模式。溫度循環(huán)為94—55—72°C三步法，只有引物，無(wú)探針，熒光染料鑲嵌在雙股螺旋鏈中間。通過對(duì)特定方向的強(qiáng)熒光檢測(cè)獲得信號(hào)，這種試劑檢測(cè)模式易產(chǎn)生非特異信號(hào)，且本底光較大。
⑵水解探針模式（Taqman）Hydrolysis Probe。溫度循環(huán)為94—60°C二步法，不僅有引物，還有另外一個(gè)特異針對(duì)擴(kuò)增模板的探針在引物對(duì)之間。在探針相鄰兩個(gè)堿基上分別結(jié)合兩個(gè)熒光染料，一個(gè)染料接受激發(fā)光得到的能量傳給了第二個(gè)染料，接受能量的第二個(gè)染料通過發(fā)射特征光子回到穩(wěn)定態(tài)。當(dāng)Taq酶在60°C延伸擴(kuò)增鏈時(shí)，遇到探針，利用Taq酶5`—3`外切酶活性將探針?biāo)獬蓡蝹€(gè)堿基，單個(gè)堿基之間距離較遠(yuǎn)，*個(gè)染料的能量無(wú)法傳給第二個(gè)染料，只好通過發(fā)射特征光子回到穩(wěn)定態(tài)，通過對(duì)溶液中*個(gè)染料的熒光檢測(cè)獲得信號(hào)。這種試劑檢測(cè)模式增加了檢測(cè)信號(hào)的特異性，但是由于利用了Taq酶5`—3`外切酶活性，一般試劑廠家只給Taq酶的聚合酶活性定標(biāo)，沒有同時(shí)給Taq酶5`—3`外切酶活性定標(biāo)，不同批號(hào)試劑之間會(huì)給定量帶來(lái)差異。另外對(duì)探針的熔點(diǎn)溫度（Tm）僅要求其高于60°C，這就使不同試劑盒之間的特異性參差不齊，而且無(wú)法做質(zhì)控檢測(cè)。
⑶雜交探針（Hybridization Probes）模式。溫度循環(huán)為94—55—72°C三步法，有引物，二個(gè)特異針對(duì)擴(kuò)增模板相鄰的探針在引物對(duì)之間，在一個(gè)探針3`堿基上結(jié)合一個(gè)熒光染料，在另一個(gè)探針5`堿基上結(jié)合第二個(gè)熒光染料。在55°C時(shí)，兩個(gè)探針都剛好接合在模板上，*個(gè)染料接受激發(fā)光得到的能量傳給了第二個(gè)染料，接受能量的第二個(gè)染料通過發(fā)射特征光子回到穩(wěn)定態(tài)，通過對(duì)結(jié)合在擴(kuò)增模板上雙探針中第二個(gè)染料的熒光檢測(cè)獲得信號(hào)。這種試劑檢測(cè)模式中熒光信號(hào)與特定雜交溫度相關(guān)，探針的濃度始終保持不變，因此可以在擴(kuò)增后檢測(cè)熔解曲線作為信號(hào)的特異性質(zhì)控。另外這種試劑檢測(cè)模式可以用于點(diǎn)突變檢測(cè)。
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